Immunologie appliquée

Le traitement d'une molécule d'IgG par une enzyme protéolytique comme la papaïne...

Scinde la molécule en deux fragments Fab et un fragment Fc

Quelles sont les cellules impliquées dans l'immunité spécifique?

- Cellules phagocytaires (granulocyte, monocyte, lymphocyte ou cellules immunocompétentes) - Cellules lymphoïdes ou immunocompétentes (lymphocytes B et T) - Cellules présentatrices d'antigènes (CPA) - Mastocytes - Cellules NK (LGC) - Plaquettes sanguines

Quels sont les deux chromogènes les plus utilisés avec l'enzyme peroxydase?

- DAB (brun) - AEC (rouge)

Nommez les 2 types d'opsonisation

- La fixation directe aux récepteurs des macrophages - L'adhérence immune

Quelles sont les caractéristiques des lymphocytes?

- Marqueurs membranaires - Récepteurs membranaires - Se transforment en cellules matures et fonctionnelles - Sont incapables de phagocytose

Quelles sont les 4 propriétés caractéristiques de l'immunité spécifique?

- Spécificité antigénique: Distinction des différents stimuli - Diversité: Production de diverses molécules pour combattre l'agresseur - Mémoire: Une 2e rencontre avec l'antigène augmente la réponse immunitaire - Reconnaissance du Soi et du Non Soi: Structures de reconnaissance sur lymphocytes et Molécules du complexe majeur d'histocompatibilité (CMH)

Quels sont les modes de détection des techniques d'immunofluorescence.

- fluorimètre - cytofluorimètre - microscope à fluorescence

Quels contrôles sont nécessaires dans les techniques d'immunohistochimie ? Expliquer à quoi servent ces contrôles. Comment sont réalisés ces contrôles ?

1. Contrôles positifs Pour chaque Ac utilisé - Tissu connu pour contenir l'Ag à l'étude: série de coupes Une coupe de ce tissu est incluse au test à chaque fois que la technique est réalisée 2. Contrôles négatifs - Vérification de l'activité enzymatique endogène Coupe traitée par le substrat seulement - Vérification de la spécificité de l'Ac primaire (absence de réactions croisées)...Non pertinent dans le cas d'un Ac monoclonal.

Quels sont les 3 étapes de la réponse immunitaire spécifique ?

1. Phase de reconnaissance 2. Phase d'activation 3. Phase effectrice

Décrire les étapes techniques de recherche d'un Ag tissulaire par immunohistochimie avec le complexe ABC.

ABC (Avidine biotine complex): pour doser Ag - Blocages: Réactions non spécifiques, enzymes - Ajout Ac primaire - Ajout Ac secondaire biotinylé - Ajout complexe Complexe avidine-biotine-peroxydase - Ajout substrat

Que veut-on dire par « anticorps spécifique »?

Ac qui réagit seulement avec l'Ag qui a suscité sa formation

Distinguer immunité acquise active et passive, naturelle et artificielle.

Acquive active: Avec délai, forte intensité et longue durée -naturelle: contact avec microorganisme -artificielle: vaccination Acquise passive: Immédiate, sans délai, faible intensité et courte durée -naturelle: pendant la grossesse et lait maternel -artificielle: thérapeutique (antitoxine diphtérique) et prophylactique (antitoxine tétanique)

Qu'est-ce qu'un antigène polyvalent?

Ag qui réagit avec plusieurs épitopes

Distinguer Ag thymodépendants et Ag thymoindépendants.

Ag thymodépendants: nécessitent la participation des lymphocyte T auxiliaire pour pouvoir induire une réponse immunitaire spécifique. Ils sont de nature protéique. Ag thymoindépendants: peuvent stimuler directement les lymphocytes B (ils reconnaissance directement les Ag thymoindépendants). Ils sont les lipopolysaccharides des parois des bactéries Gram - et ils sont les polysaccharides des pneumocoques.

Distinguer les termes alloantigène et hétéroantigène.

Alloantigène: immunogène provenant d'un autre individu de la même espèce Hétéroantigène: immunogène provenant d'un individu d'une autre espèce animale.

Distinguer les termes antigène et immunogène.

Antigène: substance qui peut réagir avec les anticorps formés ou de façon plus générale avec les produits de la réponse immune. Immunogène: substance qui peut induire une réponse immunitaire spécifique (doit être du non Soi)

Qu'est-ce qu'un vaccin?

C'est l'antigène qu'on injecte (ou ingérer) dans le corps pour faire de l'immunité active artificielle.

Qu'est-ce qu'un antigène opsonisé?

C'est quand il est recouvert par un anticorps qui le rend plus apte à être phagocyté.

Quel composant du complément est impliqué dans l'opsonisation?

C3b et Fc

Quels composés (ou complexes) ont le rôle de C3 convertase?

C4b2a

Quels sont les cations nécessaires à l'activation du complément ?

Ca2+ et Mg2+

Quels sont les activateurs de la voie classique du complément?

Complexe Ac-Ag

Quelle est la séquence d'activation du complément par la voie classique ?

Complexe Ag-Ac (Activation), C1, C4, C2, C3 convertase (C4b2a), C3, C5 convertase (C4b2a3b), C5, C5b, Complexe d'attaque membranaire (C5b6789), lyse cellulaire

13. Qu'est-ce que la réaction primaire?

Contact intime entre l'Ag (épitope) et l'Ac (paratope)

Décrire les techniques d'immunofluorescence directe et indirecte en phase hétérogène.

Directe: 1. Il y a liaison entre l'Ag fixé sur une lame de verre (particulaire) ou fixé sur billes de polyacrylamide ou sur des particules magnétiques (soluble) et l'Ac marqué par un fluorochrome (conjugué anticorps-fluorochrome) 2. Incubation où il y a formation de complexes antigène et anticorps marqué 3. Lavage où il y a élimination des réactifs non fixés 4. Examen au microscope à fluorescence où il y a de la lumière UV qui fait émettre de la lumière visible par les fluorochromes. Indirecte: 1. Il y a liaison entre l'Ag fixé sur une lame de verre (particulaire) ou fixé sur billes de polyacrylamide ou sur des particules magnétiques (soluble) et un Ac. 2. Incubation où il y a formation de complexes antigène et anticorps 3. Lavage où il y a élimination des Ac non fixés 4. Ajout d'un sérum anti-Ig où il y a des Ac marqué au fluorochrome. 5. Examen au microscope à fluorescence où il y a de la lumière UV qui fait émettre de la lumière visible par les fluorochromes.

Comment les Ac exercent-ils leur fonction effectrice?

Encourage la phagocytose, liaison de complément

Quel est le marqueur chimiluminescent utilisé par l'appareil ADVIA Centaur ?

Ester d'acridinium

Quel fluorophore est le plus utilisé en laboratoires médicaux ?

FITC : isothiocyanate de fluorescéine

Quels sont les organes lymphoïdes secondaires et quel est leur rôle?

Ganglions lymphatiques, rate, plaques de Peyer et amygdales: Organes effecteurs de l'immunité (prolifération et différentiation des lymphocytes)

Comment la voie d'introduction de l'antigène peut-elle influencer la réponse immunitaire?

IV: sollicite la rate qui déclenche une réponse humorale se qui produit des IgM et des IgG. Sous-cutané ou IM: sollicite les ganglions lymphatiques qui déclenchent une réaction de type cellulaire, humorale ou mixte se qui produit des IgM et des IgG. PO (digestive): sollicite les plaques de Peyer qui déclenchent une réponse immunitaire variable se qui produit des IgA.

Quelle classe d'immunoglobuline est présente dans les sécrétions?

IgA

Quelle classe d'Ig se fixe aux mastocytes dans la réaction d'hypersensibilité immédiate ?

IgE

La classe d'Ig présente en plus grande quantité dans le sérum d'un adulte est...

IgG

Nommez les 5 classes d'anticorps

IgG, IgA, IgM, IgD et IgE

En immunohistochimie, pourquoi faut-il apporter une attention particulière aux fixateurs?

Il doit préserver l'intégrité de l'Ag Il doit éviter la diffusion de l'Ag Il doit préserver la morphologie tissulaire Et certain demande des étapes supplémentaire (exemple, démasquage pour le formol 10%)

Quels sont les types d'immunogènes utilisés dans un vaccin?

Ils peuvent être formés d'organismes vivants, d'organismes morts ou d'anatoxines.

Décrire l'immunité naturelle.

L'ensemble des mécanismes ou des réponses qui contribuent à maintenir l'intégrité de l'organisme ou à assurer son rétablissement à la suite d'une agression ou d'une stimulation immunogénique

Quels sont les activateurs de la voie alterne du complément?

LPS Agrégat Ig Zymosan Venin

Lorsqu'un Ag est sensibilisé par un Ac qui fixe le complément, qu'arrivera-t-il à l'Ag si celui-ci est particulaire?

La fixation et l'activation du complément entraînent la lyse de l'Ag particulaire (cellule ou bactérie)

Qu'est-ce qui distingue l'immunité humorale de l'immunité cellulaire?

La réponse humorale est assurée par anticorps, transmissible par sérum et a pour cibles: agresseurs à développement extracellulaire La réponse à médiation cellulaire est assurée directement par lymphocytes T sensibilisés, non transmissible par le sérum et a pour cibles: agresseurs à développement intracellulaire, tissu étranger

Dans quelle région de la molécule d'anticorps les séquences variables des acides aminés sont-elles situées?

Le site de liaison avec l'antigène (Extrémité des fragments Fab )

En se référant à la structure des anticorps, qu'est-ce qui détermine la classe d'un anticorps?

Les chaînes lourdes: γ pour IgG, α pour IgA, μ pour IgM, δ pour IgD et ε pour IgE.

Quels sont les rôles de chaque population de lymphocytes?

Lymphocyte B: deviennent plasmocytes (Cellules qui synthétisent et sécrètent les anticorps) ou deviennent cellules mémoire Lymphocyte T (CD2): - Lymphocyte T auxiliaires ou amplificateurs (TH) (+CD4): Stimulent et amplifient la production d'Ac par les lymphocytes B Stimulent les lymphocytes T cytotoxiques Stimulent les macrophages Nécessaire à la production de lymphocytes B mémoire - Lymphocytes T cytotoxiques (Tc) (+CD8): Élimination des cellules infectées par un virus, des cellules tumorales et des cellules d'un greffon étrangère.

Distinguer les deux populations de lymphocytes.

Lymphocyte B: Immunité à médiation humorale, Anticorps Lymphocyte T: Immunité à médiation cellulaire, Cellules directement actives

Quelles sont les activités biologiques du complément?

Lyse cellulaire Neutralisation virale Opsonisation (C3b et Fc) Adhérence immune (C3b) Activité anaphylatoxine (C4a, C3a, C5a) Activité chimiotactique (C3a, C5a, C5b67) Élimination des complexes immuns circulants

Quels sont les organes lymphoïdes primaires et quel est leur rôle?

Moelle osseuse primaire et thymus: Production de cellules immunocompétentes et leur maturation (Lympho B dans la moelle osseuse et Lympho T dans le thymus)

Décrire une méthode ELISA pour doser un Ac (hétérogène)

Méthode indirecte, par saturation Étape 1: Immobiliser l'Ag sur une surface solide - Ajouter Ag de capture en excès - Lavage - Blocage: Ajouter substance protéique pour couvrir la surface solide exposée. - Lavage Étape 2: Réaction de l'Ac avec l'Ag immobilisé - Ajouter sérum du patient qui contient l'Ac à doser - Lavage - Ajouter le conjugué: un Ac anti-Ig marqué par l'enzyme - Lavage Étape 3: Changement de couleur - Ajouter le substrat : l'enzyme converti le substrat en produit coloré. L'intensité de la coloration sera directement proportionnelle à la quantité d'Ac immobilisée sur le support solide.

Décrire la méthode EMIT pour doser un Ag (homogène)

Méthode par compétition Il y a compétition pour l'Ac entre un Ag marqué à un enzyme inactif et l'Ag à doser: Lorsqu'il y a liaison entre l'Ag marqué et l'Ac, il y a activité enzymatique puisque l'enzyme devient actif. Si l'Ag à doser se lie à l'Ac, il ne se passe rien. Lors de l'ajout du substrat, moins il y a d'activité enzymatique, plus il y a d'Ag à doser et vice versa.

Décrire les techniques d'immunofluorescence en phase homogène.

Méthode par compétition pour doser des Ag

Décrire une méthode ELISA pour doser un Ag (hétérogène)

Méthode sandwich, par saturation Étape 1: Immobiliser l'Ac sur une surface solide - Ajouter Ac de capture en excès - Lavage - Blocage: Ajouter substance protéique pour couvrir la surface solide exposée. - Lavage Étape 2: Réaction de l'Ag avec l'Ac immobilisé - Ajouter sérum du patient qui contient l'Ag à doser - Lavage - Ajouter le conjugué: un Ac marqué par un enzyme - Lavage Étape 3: Changement de couleur - Ajouter le substrat : l'enzyme converti le substrat en produit coloré. L'intensité de la coloration sera directement proportionnelle à la quantité d'Ag immobilisée sur le support solide. ou Méthode par compétition Étape 1: Immobiliser l'Ac sur une surface solide - Ajouter Ac de capture en quantité limitée - Lavage - Blocage: Ajouter substance protéique pour couvrir la surface solide exposée. - Lavage Étape 2: Compétition entre l'Ag du patient et l'Ag marqué pour se lier avec l'Ac immobilisé - Ajouter en même temps le sérum du patient qui contient l'Ag à doser (non marqué) ainsi qu'un Ag pas rapport marqué par un enzyme - Lavage Étape 3: Changement de couleur - Ajouter le substrat : l'enzyme converti le substrat en produit coloré. L'intensité de coloration est inversement proportionnelle à la quantité de substance à doser

Expliquer le principe des méthodes d'amplification PAP et ABC.

PAP (peroxydase-anti-peroxydase): pour doser Ag - Blocages: Réactions non spécifiques, enzymes - Ajout Ac primaire - Ajout Ac secondaire qui doit pouvoir reconnaître l'Ac primaire et le 3e Ac (Ac du système révélateur) - Ajout Ac anti-marqueur (ici un Ac anti-enzyme) - Substrat ABC (Avidine biotine complex): pour doser Ag - Blocages: Réactions non spécifiques, enzymes - Ajout Ac primaire - Ajout Ac secondaire biotinylé - Ajout complexe Complexe avidine-biotine-peroxydase - Ajout substrat

Quel type de phase solide est utilisé dans l'ADVIA Centaur ?

Particules paramagnétiques (PMP)

Faire la différence entre un fluorophore et une substance chimiluminescente

Pour un fluorophore, c'est une source lumineuse qui l'excite pour qu'il émette de la lumière. Pour une substance chimiluminescence, c'est une réaction chimique qui l'excite pour qu'elle émette de la lumière.

Quels sont les meilleurs immunogènes (selon la nature chimique) et pourquoi ?

Protéines et polysaccharides. Ils sont grande complexité chimique.

Distinguer la réponse humorale primaire de la réponse humorale secondaire aux points de vue quantitatif et qualitatif.

Quantitatif: La réponse secondaire présente un temps de latence plus court, une phase de croissance plus intense et une phase de décroissance d'une durée plus longue que la réponse primaire. Qualitatif: Dans la réponse primaire, on voit que les IgM apparaissent d'abord et sont progressivement remplacées par les IgG. Dans la réponse secondaire, la quasi-totalité des immunoglobulines produites sont des IgG.

Nommer et décrire les différents types de tests utilisés dans l'ADVIA Centaur ?

Type sandwich: pour doser un Ag + Substance à doser (Ag) + Ac marqué à L'EA (réactif Lite) spécifique à l'Ag à doser + PMP enrobées avec un Ac spécifique à l'Ag à doser = Émission de lumière est proportionnelle à la concentration de la substance à doser Type compétition: pour doser un Ag #1 Compétition entre les Ag pour se fixer aux Ac (PMP) + Substance à doser (Ag) + Ag marqué à L'EA (réactif Lite) + PMP enrobées avec un Ac spécifique à l'Ag #2 Compétition de sur qui l'Ac va se lier + Substance à doser (Ag) + Ac marqué à l'EA (réactif Lite) + PMP enrobées avec l'AG (même que celui à doser) = Émission de lumière est inversement proportionnelle à la concentration de la substance à doser Type capture d'anticorps: pour doser un Ac + Substance à doser (Ac) + PMP enrobées avec un Ac anti-IgM + Ag marqué à l'EA (réactif Lite) se lie aux IgM = Émission de lumière est proportionnelle à la concentration de la substance à doser

Donnez un exemple d'un antigène particulaire

bactéries, cellule (globules rouges)

Comment appelle-t-on la partie de l'antigène reconnue par l'anticorps?

déterminant antigénique ou épitope

Quel est le synonyme d'anticorps?

immunoglobine

Comment appelle-t-on une substance capable de susciter la formation d'un anticorps?

immunogène

Donnez un exemple d'un antigène soluble

protéines