Examen 1

Ciprofloxacino

Fluoroquinolona. Inhibe la Síntesis de Acidos Nucleicos.

Caracteristicas de Colonias

Forma. Margen. Elevación. Tamaño. Textura. Apariencia. Pigmentación. Propiedades Opticas.

Microscopio Compuesto

Fue desarrollado por Galileo Galilei, a la misma vez que desarrollaba el telescopio. Sus primeros microscopios (1609) eran, basicamente, telescopios pequeños con los mismos 2 lentes, un objetivo biconvexo, y un ocular biconcavo. Para el 1624, ya habia desarrollado un microscopio que tenia 3 lentes biconvexos. - No magnificaba mucho más que sus telescopios, pero Galileo estaba más interesado en los telescopios que en los microscopios.

Factores de Producción de Radicales

Fumar. Contaminación del Aire. Inflamación. Metabolismo. Luz UV. Radiación Ionizante.

Primer Genoma Bacteriano Secuenciado

Genoma de Haemophilus Influenzae.

Medios Selectivos

Medios que favorecen ciertos grupos, e inhiben otros. Se puede utilizar antibioticos, pH, otros...

Medios Complejos

Medios que tienen una gran cantidad de compuestos desconocidos.

Filtros de Membrana

Membranas porosas con poros de tamaño definido que remueven microorganismos por muestreo físico.

Soluciones Hipotónicas

Menor concentración de soluto que en la célula. La célula gana agua. - Células con pared sobreviven. - Células sin pared revientan.

Neutrófilos

Microbios que crecen mejor alrededor de un pH neutral.

Acidófilos

Microbios que crecen mejor en habitats acídicos.

Alcalinofilos

Microbios que viven en suelos y agua alcalina.

Virus en Australia

Provenía de viajeros de Irán.

Anaeróbicos Facultativos

Pueden sobrevivir con o sin oxígeno. Suelen verse principalmente en la parte superior de un tubo, pero tambien se pueden ver en el resto del tubo. Tienen Superoxido Dismutasa, y Catalasa.

Antibioticos de Espectro Amplio

Antibioticos que atacan una gran variedad de patógenos.

Estreptomicina

Antibiótico activo en contra de la Tuberculosis. Fue descubierto por Selman Waksman (1944). - Recibió el Nobel en el 1952. Viene de bacterias filamentosas. Aminoglucocido. Inhibe la Síntesis de Proteínas.

Yodo

Antiseptico para la piel. Oxida las células constituyentes, e iodiza las proteinas. Puede matar esporas en altas concentraciones. Puede dañar la piel, mancharla, o causar alergias. Betadine. - Complejado con acarreador organico. - Se libera lentamente para minimizar quemaduras.

Simbiosis

Asociacion entre organismos de diferentes especies. - Antagonismo: + Ambos pierden. - Mutualismo: + Ambos se benefician.

CFU

"Colony Forming Unit".

¿Por qué los Postulados de Koch no aplican a todas las enfermedades?

- Patógeno No Cultivable. - Patógeno Solamente Infecta Humanos. + Problemas Eticos. - Enfermedades de muy lento desarrollo. - Etiología Más Compleja.

Psicrófilos

0 °C a 20 °C. No suelen vivir en el cuerpo humano.

Psicrótrofos

0 °C a 35 °C. No suelen vivir en el cuerpo humano.

Postulados de Koch (1884)

1. Agente causativo debe estar en todos los hospederos enfermos pero en ningún hospedero sano (controles). 2. Hay que aislar el agente y cultivarlo fuera del hospedero. - Se cultiva el patógeno en medios de cultivo puro. 3. Cuando se re-inocula el agente en un hospedero susceptible, debe desarrollar la enfermedad. 4. Hay que re-aislar el mismo agente del hospedero que inoculaste.

División Celular

1. Crece. 2. Se empieza a dividir. - Se replica el DNA circular. 3. Invaginación. 4. Se producen 2 células. - Pueden mantenerse unidas por la pared, o separarse.

Estrategia de HGP

1. Romper el genoma en pedazos. 2. Clonar cada pedazo en un vector. - Meter un plasmido en una bacteria que lo replica. 3. Ordenar los clones, para no secuenciar la misma seccion muchas veces. 4. Secuenciar. Más Laboratorio.

Replicación del Plásmido

1. Se alcanza la masa de iniciación. 2. Se inicia la replicación. 3. Se separan los origenes. 4. La célula se elonga y el proceso continua. 5. Célula alcanza su tamaño máximo. 6. Se separan los cromosomas. 7. Inicia la formación del septum. 8. Se dividen las células.

Tinción de Endosporas

1. Se utiliza Verde Malaquita con calor para penetrar la pared de las endosporas. 2. Lavado con agua. 3. Safranina como contratinte.

Incorporación de Peptidoglucano

1. UDP se enlaza a NAG. 2. Algunas de las moléculas de UDP-NAG se convierten a UDP-NAM. 3. Se transfiere el NAM de UDP a Bactoprenol. 4. NAG se enlaza a Bactoprenol-NAM. - Produce Bactoprenol-NAM-NAG. 5. Autolisinas en los divisomas degradan los enlaces en el saculo de peptidoglucano existente. - Permite la inserción de las nuevas unidades de NAM-NAG.

Bacilos

Bacterias en forma de baston.

Espiroquetas

Bacterias onduladas, en forma de tirabuzon.

Cocos

Bacterias redondas.

Espirilos

Bacterias un poco dobladas, en forma de tilde.

Humores

Bilis Negra. Bilis Amarilla. Sangre. Flema.

Campos con los que solapa la Microbiología

Bioquímica. Genética. Evolución. Inmunología. Salud Pública. Epidemiología.

Mordante

Ayuda a pegar el tinte a la pared celular.

Alrededor del 1%

Especies de Bacterias que tienen nombres.

Preguntas Claves de la Edad Dorada de la Microbiología (1850s-1910s)

1. ¿Hay generación espontanea de microorganismos? 2. ¿Qué causa la fermentación? 3. ¿Qué causa las enfermedades? 4. ¿Cómo se puede prevenir la infección y enfermedad?

Proyecto del Genoma Humano

1990 - 2003. F. Collins. Metas: - Descubrir todos los genes. + Estimado original de 80 mil genes. - Secuenciar los 3 x 10^9 pb. $3 billones. Al inicio, se consideraba como ir a la luna: - Un megaproyecto demasiado costoso.

Mesófilos

20 °C a 45 °C. Pueden vivir en el cuerpo humano. - Temperatura del cuerpo humano es alrededor de 37 °C.

Largo de Onda del Espectro Visible

400 - 700 nm. Mientras más corto es el largo de onda, mayor es la energía.

Termófilos

55 °C a 85 °C. No suelen vivir en el cuerpo humano.

Ribosomas Bacterianos (y Archea)

70 S. - 16 S en la subunidad pequeña. - 23 S y 5 S en la subunidad grande.

Ribosomas Eucariotas

80 S. - 18 S en la subunidad pequeña. - 26 S y 5-5.8 S en la subunidad grande.

Capa S en Gram Negativa

Capa S se adhiere a la membrana externa.

Domagk y Trefouel (1935)

Descubrieron las sulfonamidas, y las sulfa-drogas.

Ritonavir

Inhibidor de Proteasas. VIH.

Número Más Probable (MPN)

Método estadístico para determinar concentración.

Genoma

Toda la materia genetica de un organismo.

Hipertermófilos

85 °C a 113 °C. No suelen vivir en el cuerpo humano.

Inmersión de Aceite

Aceite remplaza al aire. Muchos de los rayos de luz que no entraban en el objetivo por reflexión y refracción en las superficies de los objetivos ahora si entran. Resulta en un aumento de la resolución, y en apertura numérica.

Mycobacteria

Acido Micotico da caracteristicas especiales que los hacen resistentes a agentes antibioticos.

Métodos de Conteo Indirecto

Actividad Metabolica. Peso seco. - Secar y pesar. Turbidez. - Más crecimiento, más turbidez. (Espectrofotometria). qPCR. - Técnica Molecular.

Antagonistas Metabolicos

Actuan como Antimetabolitos. - Bloquean la funcion de las rutas metabolicas inhibiendo enzimas competitivamente. Son análogos estructurales a intermediarios metabolicos naturales. Sulfonamidas (Sulfamidas).

Agentes Estaticos

Agentes que inhiben el crecimiento. Bacteriostaticos y Funguistaticos.

Agentes Cidales

Agentes que matan patogenos y no patogenos, pero no necesariamente endosporas. Bactericidas, Funguicidas, Alguicidas, y Virucidas.

Antisepticos

Agentes químicos que matan o inhiben el crecimiento de microorganismos cuando se aplica al tejido.

Agentes Quimioterapéuticos

Agentes químicos utilizados para tratar enfermedades. Destruyen los microbios patogénicos, o inhiben su crecimiento en el hospedero. La mayoría son antibióticos. Se basa en el concepto de Toxicidad Selectiva.

Desinfectantes

Agentes, usualmente químicos usados para desinfectar. Son utilizados generalmente en objetos inanimados. - Superficies Inertes.

Miasmas

Aires Malos.

Paul Ehrlich (1910)

Alemán. Desarrolló una droga sintética a base de arsénico, Salvarsan, para tratar Sífilis. Es super tóxico, pues contiene arsénico.

Respuestas de Tolerancia a Acidez

Algunos tienen una bomba que saca los protones de la célula. Otros sintetizan proteínas a prueba de calor o acidez que protegen a las proteínas. - Chaperonas.

Endosporas

Altamente resistentes a calor, resequedad, y agentes químicos.

Primer Caso de COVID-19

Anciano de Wuhan. Desarrolo síntomas a partir del 1 de diciembre de 2019.

Penicilina

Anillo Betalactamico. - Beta-lactamasas o Penicilinasas hidrolizan los enlaces del anillo. Cambiar el grupo R cambia los mecanismos de accion del antibiotico. Todas bloquean la sintesis de transpeptidación. - Previene la sintesis de la pared. - Solo lleva a cabo su función cuando se esta formando la pared. + Si la pared ya esta formada, no tiene gran efecto. Se enlazan a proteínas periplásmicas. Pueden activar autolisinas o hidrolasas de mureina. Estimulan holinas para formar hoyos o lesiones en la membrana. Las semisinteticas tienen un espectro más amplio que las naturales. 1-5% de los adultos en USA son alergicos a ella.

Macrolidos

Anillos grandes. Se asocian a la subunidad 50S. - Inhiben la elongación. Eritromicina. - Bacteriostatico. - Espectro Amplio. - Se usa en pacientes alergicos a penicilina.

Concepto de Enfermedad

Antes se atribuían a causas divinas (como la furia de los dioses), y se hacían rituales y buscaban soluciones en la misma naturaleza. Esto no ha cambiado tanto, pues aún existen personas que piensan esto. - Ejs: + Algunos rabinos argumentan que aquellos países donde no se celebran paradas del orgullo gay no tienen problemas con el coronavirus. * Esto es FALSO. Países musulmanes tiene problemas graves.

Vancomicina

Antibiotico utilizado como tratamiento alterno cuando los microorganismos son resistentes a tratamientos con otros antibioticos. Glicopéptido. Molécula bastante tóxica. Se considera una droga de último recurso. - Infecciones con Estafilococos y Enterococos.

Antibioticos de Espectro Estrecho

Antibioticos que atacan solo algunos patógenos diferentes.

Radicales Libres

Atomos o Moleculas que tienen un electron sin parear en su capa de valencia. Son altamente reactivos. Producen estrés/daño oxidativo. Son parte del procedimiento de envejecimiento. O2 -> Oxigeno. O2- -> Superóxido. . O2 -2 -> Peróxido. H2O2 -> Peróxido de Hidrógeno.

Médicos de la Peste Negra

Atribuían la peste a Miasmas. Utilizaban máscaras para protección contra miasmas. Hacían sangrías. - Sacaban sangre. Ponían sapos o sanguijuelas para balancar los humores. Ejemplos: Paracelso, Nostradamus.

Tinción

Aumentan el contraste y la resolución al darle color a los especimenes con manchas o tintes. Los tintes microbiológicos contienen cromóforos.

Microbios en Soluciones Hipertónicas

Aumentan la concentración interna de solutos con solutos compatibles para aumentar la concentración osmótica interna. Tienen que ser solutos compatibles con su metabolismo y su crecimiento.

Crecimiento Microbiano

Aumento en el tamaño de la población de microbios. NO AUMENTA EL TAMAÑO DEL CUERPO.

Fermentación

Azucar de Remolacha -> EtOH. Vinos. - Los viñeros financiaron investigaciones para evitar que los vinos se dañaran durante la fermentación. A veces se dañaba. - Se producía ácido láctico, acético, en vez de EtOH. Pasteur se dió cuenta que solo un isómero estaba presente. - Evidencia de Organismos Vivos. - Levaduras -> EtOH. - Bacterias -> Acido Lactico, Acetico

Inhibidores de Síntesis de Acidos Nucleicos

Bloquean la replicacion del DNA. - Inhiben DNA Polimerasa. - Inhiben DNA Helicasa. Bloquean la transcripcion. - Inhiben RNA Polimerasa. No son tan selectivamente tóxicas, pues no es grande la diferencia entre la sintesis de acidos nucleicos de bacterias y eucariotas. Quinolonas.

Rastreo de Contactos (Contact Tracing)

Cada persona enferma debe informar con que personas ha estado recientemente para verificar si ellos también están infectados.

Pasteurización

Calor controlado a temperaturas por debajo del punto de ebullicion. Se usa para leche, cerveza, y otras bebidas. No esteriliza, pero mata los patogenos presentes, realentando el proceso de descomposicion. 65 °C por 30 mins. 71 °C por 15 seg. 130 °C por 1 seg.

Refracción

Cambio de dirección de la luz cuando pasa de un medio a otro. La dirección y magnitud del cambio es determinada por los índices de refracción de los dos medios que forman la interfase. Provoca que las imágenes se inviertan en el microscopio.

Factores que Afectan la Habilidad de Alcanzar el MIC

Cantidad Administrada. Ruta de Administración. Velocidad de Absorción. Razón a la cual se elimina del cuerpo.

Capa S en Gram Positiva

Capa S se adhiere a la superficie de peptidoglucano.

Capa S

Capas regularmente estructuradas compuestas de proteínas o glucoproteínas que se autoensamblan. Puede ser considerada parte de la membrana celular. Tiene potencial uso en la nanotecnología ya que se asocia espontaneamente (sin inversión de energía).

Enzimas para Radicales Libres

Catalasa. - 2 H2O2 -> 2 H2O + O2. Peroxidasa. - H2O2 + NADH + H+ -> 2 H2O + NAD+. Superóxido Dismutasa. - 2 O2 -2 + 2 H+ -> H2O2 + O2. + Requiere de Peroxidasa o Catalasa, pues produce H2O2.

SARS (Síndrome Agudo Respiratorio Severo)

Causó un brote en Asia entre 2002-2003. Infectó alrededor de 8 mil personas. - Mató a casi 800.

Metagenoma Humano

Celulas Humanas: 10^9. Genes Humanos: 22 mil. Bacterias 10^10. Genes Bacterianos: mas de 1 millon. Somos más bacterianos que humanos en este sentido.

Robert Hooke (1635-1703)

Científico Inglés. Descubre la célula. Dibujó células de diferentes microorganismos.

Cultivos Especiales

Ciertos patógenos no crecen en medio, por lo que hay que cultivarlos en animales o células vivas.

Joseph Lister (1860s)

Cirujano Inglés. Cirugía Aséptica. Utilizó un desinfectante químico (Fenol) para prevenir infecciones de las heridas quirúrgicas, tras ver el trabajo de Pasteur donde establecia que habían microbios en el aire que podían dañar la comida, y que causaban enfermedades animales. Lister-ine...

Quorum Sensing

Comunicación Química Intra e Interespecifica en bacterias. Es dependiente de densidad. Hay algunas cosas que no vale la pena hacer si no hay suficiente concentracion de celulas, como producir una toxina.

Biofilms

Comunidad compleja, y dinámica de microbios encerrada en una matriz extracelular. - Adhiere las celulas unas a otras, o a sustratos. - Secuestra nutrientes del ambiente. - Protege a los individuos. Ocurren naturalemente. Pueden formarse en cualquier superficie. Los microbios crecen más cuando se pegan a una superficie (sesiles) que cuando estan flotando libremente (planktonico). Ocurren interacciones entre los organismos: - Intercambio metabolico. - Intercambio de DNA. - Intercambio de señales (comunicacion). Muchos microorganismos son más peligrosos cuando son parte de esta, porque pueden encender genes patogénicos.

Biofilm

Comunidad de microorganismos en una matriz extracelular pegada a una superficie. Los Fimbria, Pili, Capsula, y Slime Layer pueden aportar.

Microbiota (Microbioma)

Comunidad microbiana asociada con una muestra. Ej.: Biofilm, boca, tracto digestivo, raices de plantas.

Aldehidos

Comunmente se usa Formaldehido o Glutaraldehido. Son moleculas altamente reactivas. Son esporicidas, y pueden usarse como esterilizantes quimicos. Se enlazan a acidos nucleicos y proteinas y los inactivan.

Concentración Mínima Inhibitoria (MIC)

Concentración menor de una droga que inhibe el crecimiento de patógeno.

Concentración Mínima Letal (MLC)

Concentración menor de una droga que mata el patógeno.

Lipopolisacaridos (LPS)

Consisten de 3 partes: - Antigeno O (Cadena Lateral O) - Polisacarido Central I. + Ambas se extienden fuera de la célula. - Lipidos A + Estan incrustados en la membrana externa.

Peptidoglucano

Contiene 2 derivados de glucosa. - NAM (N-acetylmuramic acid). - NAG (N-acetylglucosamine). Estan enlazados por un enlace beta. - Bacterias: beta-(1,4). + Es susceptible a Lisozima. - Archaea: beta-(1,3). + No es susceptible a Lisozima. Es un polimero de subunidades identicas que forman hebras largas. - Suelen tener cadenas de aminoacidos D- y L- alternantes. Las cadenas suelen estar crosslinked por péptidos para mayor fortaleza.

Tubo Inclinado

Contiene medio sólido. Dura más tiempo que una placa petri sin secarse. - Porque esta menos expuesto al aire. Aumenta el área superficial.

Microscopio de Luz Simple

Contiene un solo lente. Es similar a una lupa. Fueron los utilizados por van Leeuwenhoek para observar microorganismos (y telas). - Sus microscopios tenian buena magnificación y buena resolución a pesar de tener un solo lente.

Importancia de LPS

Contribuyen a la carga negativa en la superficie de la célula. Ayudan a estabilizar las estructuras en la membrana externa. - La hace más resistente al medio ambiente. Pueden contribuir a la unión de superficies y formación de biopeliculas. Crean una barrera de permeabilidad. Pueden actuar como endotoxinas. Permiten protección de las defensas del hospedero. - Antigeno O.

Microscopio de Fase de Contraste

Convierte la diferencia en indice de refraccion y/o densidad de celda en variaciones de intensidad de la luz. Algunos rayos del cono hueco de luz pasan a traves de celulas sin tincion fuera de fase. - Produce una imagen oscura sobre un fondo brillante. - Los rayos son desviados fuera de fase por el especimen. Es excelente para observar células vivientes sin tinción. La célula se ve más oscura dependiendo del índice refractivo de la celda.

Generación Espontánea

Cosas vivas pueden surgir de cosas inanimadas. Aristóteles creía en ello. - En aquellos tiempos, era inconcebible estar en contra de Aristóteles. Ej. Pensaban que ratones nacían de ropa sucia.

Microscopio Confocal (CLSM)

Crea imágenes más nítidas, en ocasiones en 3D, usando un haz de laser, una apertura para eliminar la luz extraviada, y una interfase a una computadora. Tiene numerosas aplicaciones, incluyendo el estudio de biofilms.

Inclusiones

Cualquier cosa compartamentalizada dentro de la célula. - Evitan tener ciertas sustancias en el citoplasma. Permiten almacenaje. Muchas veces estan delimitadas por una sola capa de fosfolipidos. Ej: - Magnetosomas (Fe3O4) + Brujulas Biologicas. - Granulos de PHA y PHB + Bioplásticos. - Vesículas de Gas. + Permiten mayor flotación a cianobacterias.

Francesco Redi (1626-1697)

Cuando pedazos de carne descomponiendose se mantenían aislados de moscas, no se desarrollaban gusanos. - Aquella carne expuesta a moscas se infestaba prontamente. Esto hizo que los científicos empezaran a dudar de la teoría de Aristóteles.

Toxicidad Selectiva

Cuando un compuesto es capaz de matar un patógeno sin afectar grandemente al hospedero. Ej.: Uso de Arsénico contra la Sífilis. - Concentraciones Bajas.

Vacunas de Pasteur

Cultivaba la bacteria que causa el cólera avícola. - Se dió cuenta de que el cultivo perdía virulencia con el tiempo. + Uso esto para vacunar gallinas contra la cólero, lo que funcionó. Tambien, habia trabajado con una vacuna contra la rabia en perros. - En 1885 le llevaron un niño de 9 años mordido por un perro rabioso. + Lo inoculó con una dosis atenuada de rabia de perro. * El niño presentó resistencia y no murió. Vacuna -> Vaca.

Radiación UV

DNA absorbe al largo de onda de 260 nm. Mutaciones pueden llevar a la muerte. Provoca la formación de dimeros de Timina en el DNA. Requiere de exposición directa a la superficie microbiana. Daños al DNA pueden ser reparados por medio de varios mecanismos.

Plásmidos

DNA extracromosomal. - Se encuentra en bacterias, archeas, y algunos hongos. - Usualmente son moleculas de DNA pequeñas, circulares. Existen y se replican independientemente de los cromosomas. - Episomas - pueden integrarse a los cromosomas. - Se heredan durante la division celular. Contienen pocos genes, usualmente no esenciales. - Proveen ventajas selectivas al hospedero. Se clasifica basado en el modo de existencia, en su extensión, y en su función.

Sobrellevar Resistencia

Dar drogas en concentraciones apropiadas. Dar combinación de drogas. Usar drogas solo cuando es necesario. Desarrollar nuevas drogas. Usar bacteriofagos para tratar enfermedades bacterianas.

Florey, Chain, y Heatley

Demonstraron la efectividad de la Penicilina en el 1939. Recibieron un Premio Nobel en el 1945 por su descubrimiento y producción.

Habilidad de llegar al sitio de infección

Depende de la forma en que se administra. - Oral. + Puede ser afectado por los ácidos estomacales. - Tópico. - Rutas Parenterales. + Inyecciones Intravenosas, Intramusculares o Subcutaneas. + Alcanzar infecciones bien diseminadas en el cuerpo. La droga puede ser excluida por cuágulos o por tejido necrotizado.

Paul Ehrlich (1904)

Desarrolló el concepto de Toxicidad Selectiva. Identificó tintes que trataban efectivamente la enfermedad del sueño africana.

Bacteriorodopsina

Descubierto recientemente en alfa-proteobacterias no cultivables. Forma novedosa de captar energia de la luz solar. Encontraron genes para más de 700 tipos, muchos bien distintos.

Ernest Duchesne

Descubrió por primera vez la Penicilina en el 1896, pero su descubrimiento se perdió.

Isaac Newton

Descubrió que la luz blanca es a mezcla de todos los largos de onda. Descubrió que un prisma permite descomponer dicha mezcla.

Fenoles

Desinfectantes comunmente usados en laboratorios y hospitales. Actuan desnaturalizando proteinas y disrumpiendo en membranas celulares. Son tuberculocidales. Son efectivos en presencia de materia organica. Son longevos. Tienen un olor desagradable y pueden provocar irritacion de la piel.

Agentes Químicos

Desinfectantes deben ser efectivos contra una gran variedad de agentes infecciosos a bajas concentraciones. Deben ser efectivos en presencia de materia organica. Debe ser estable en almacenamiento. El sobreuso de algunos antisepticos han posiblemente provocado que las bacterias desarrollen resistencia a antibioticos.º

Esterilización

Destrucción o Remoción Total de Microorganismos Viables. Es la mejor ya que se encarga de remover/destruir todos los organismos, mientras que los otros se enfocan en agentes patogenicos o en disminuir poblaciones.

Calor Húmedo

Destruye viruses, hongos, y bacterias. Hervir el agua no destruirá esporas, y por lo tanto, no esteriliza. Degrada acidos nucleicos, desnaturaliza proteinas, y disrumpe membranas.

Amonio Cuaternario

Detergentes que tienen actividad antimicrobiana y son desinfectantes efectivos. Son moleculas anfipaticas. Detergentes cationicos son efectivos. - Matan la mayoria de las bacterias, pero no M. tuberculosis, ni endosporas. - Son seguros y faciles de usar. + Se inactivan con agua y jabon.

Prueba de Uso Diluido

Determina el rango en el que una cantidad determinada de bacterias es destruida al utilizar el agente quimico.

Contraste

Diferencias en intensidad entre 2 objetos, o entre objeto y fondo. Es importante para poder determinar la resolucion. Las tinciones lo aumentan, al igual que el uso de luz en fase.

Membrana Lipidica Archea

Difiere de la bacteriana y la eucariota en que tiene hidrocarburos ramificados enlazados a glicerol por enlaces tipo eter (en vez de ester). - Enlaces eter son mas resistentes al calor que los ester. Se suelen encontrar fosfolipidos polares, sulfolipidos, glucolipidos, y lipidos unicos en estas. - Unidades de isopreno (5 carbonos, ramificado). Algunas tienen estructura de monocapa en vez de bicapa. - Hace que la membrana sea más rigida. - Le da mayor estabilidad a altas temperaturas.

Métodos de Conteo Directo

Diluciones Seriales y Conteo de Colonias Viables en Placa. Filtración por Membrana. Número Más Probable. Conteo con Microscopio. Contador Electrónico. Es necesario contarlas para monitorear la concentración de la muestra.

Prueba de Discos de Difusión

Discos impregnados con la droga se colocan sobre una placa. El agente antimicrobiano se difunde en la placa. - Si es efectivo, inhibe el crecimiento a su alrededor. Que un área de inhibición sea mayor no implica que sea mejor que otro con menor área. - Se debe comparar el diametro con una tabla.

Longitud Focal

Distancia entre el centro del lente y el Punto Focal. La fuerza del lente se relaciona a este. - A menor ______, mayor magnificación.

Li Wenliang

Doctor. Trabajaba en el Hospital Central de Wuhan. 7 pacientes con Neumonía en Cuarentena. Advirtió a sus colegas sobre un posible brote viral. Fue detenido por la policía, junto a otros 8 médicos por "DIFUNDIR RUMORES". Poco después de regresar a trabajar, contrajo COVID-19. Murió el 7 de febrero. - 34 años. - Dejo a un hijo y a su esposa embarazada.

Procariotas

Dominio Bacteria, y Dominio Archaea. Células no tienen núcleo. No tienen estructuras internas recubiertas por membranas. Son pequeñas. - 0.2 - 4.0 um de ancho. - < 15 um de largo. Solo algunas son más grandes: - Epulopiscium fischelsoni. - Thiomargarita namibiensis.

Eucariotas

Dominio Eukarya. Tienen núcleo. Tienen organelos internos recubiertos por membrana. - Nucleo. - Mitocondria. - Cloroplasto. - Aparato de Golgi. Son más grandes. - 10 - 200 um en diametro. Tienen estructuras más complejas.

Tamiflu

Droga en contra del virus de la Influenza. Tambien conocido como Oseltamivir. Inhibidor de Neuraminidasa. - Al inhibirla, le dificulta al virus propagarse a otras células.

Efectos Secundarios

Efectos No Deseados de las drogas en las células hospederas.

Radiacion Visible

En altas intensidades genera oxígeno singlete. - Agente Oxidante Fuerte. Pigmentos Carotenoides protegen a muchos microorganismos expuestos a la luz de la fotooxidación.

Quimiotaxis

En presencia de un atrayente, la frecuencia de Tumble se reduce intermitentemente. Run en dirección al atrayente es más prolongado. Su comportamiento puede ser alterado por concentraciones temporales de sustancias químicas. Puede darse tanto en forma atrayente, como en forma repelente.

John Snow (1855)

Encontró que el Cólera en Londrés era más frecuente alrededor de una bomba de agua que se encontraba en Broad Street. Esto comprendió el primer estudio epidemiológico.

Principales Causas de Muerte en 2008

Enfermedades Cardíacas. Cáncer. Derrame Cerebral.

Florence Nightingale (1855)

Enfermera. Higiene en hospitales en la Crimea. Fundó la primera escuela de enfermería.

Lisozima

Enzima que hidroliza los enlaces beta-(1,4) de los residuos de NAM y NAG en el peptidoglucano de la pared celular de bacterias. Suele encontrarse en: - Lagrimas. - Saliva. - Mucosidad.

Prueba E

Es conveniente para Patógenos Anaeróbicos. Es similar a la prueba de discos de difusión, pero utiliza tiras en vez de discos. Contiene un gradiente de antibióticos. La intersección entre la zona elíptica con la tira indica el MIC.

Peste Bubónica (Peste Negra)

Es el mal que más ha impulsado a la ciencia. Es provocada por una bacteria: Yersenia Pestis. - Su hospedero primario es la rata. - Su hospedero secundario es el hombre. - Su vector es la pulga. - Pulgas de las ratas saltaban a los humanos. Probablemente llegó a Europa en barcos que viajaban desde Asia. Mató a 25-50 millones durante 2 siglos. - Alrededor del 10-25% de la población mundial. - No era la primera vez que brotaba esta enfermedad. + Ya había surgido en el 541 dC (Plaga de Justiniano).

Concentracion de O2

Es esencial para muchas células. Es el aceptador final de electrones en la cadena de transporte de electrones. Es necesario para biosintesis. Pero... Puedes ser tóxico.

Flagelo

Es importante para el movimiento. Son estructuras que se extienden más allá de la superficie celular. No estan presentes en todas las bacterias.

Calor Seco

Es menos efectivo que la esterilización por calor húmedo, ya que requiere de temperaturas más altas, y mayor tiempo de exposicion. - 160-170 °C por 2-3 horas. Oxida las células constituyentes y desnaturaliza las proteínas. Se utiliza en incineradores para esterilizar las azas de inoculacion en los laboratorios de microbiologia.

Flagelo Archea

Es más fino que el de las bacterias. Contiene más de un tipo de Flagelina. No son huecos. Es dificil distinguir entre el Cuerpo Basal y el Gancho. Su crecimiento ocurre a nivel de la base, y no a nivel de la punta.

Cápsula (Glicocaliz)

Es organizada. Esta sujeta firmemente a la superficie de la célula. Puede prevenir que la bacteria sea reconocida por el hospedero. Evita la desecación. Suele estar presente en especies patogénicas.

Filtración por Membrana

Es un buen método para concentrar muestras con pocas células. Ej.: Agua de Mar.

EMB

Es un medio selectivo y diferencial. Eosin y Methylene Blue inhiben el crecimiento de bacterias Gram positivas. Contiene lactosa, la que diferencia bacterias no-entericas. - La fermentacion de la lactosa produce una diferencia en color.

Resistencia a Drogas

Es un problema que va en incremento. - Una vez se origina en la poblacion, puede ser transmitida a otras bacterias. - Un mecanismo de resistencia no es especifico a un solo tipo de droga. Se ha encontrado resistencia a antibioticos que aun estaban por desarrollarse. Cuando los microorgansimos estan en biofilms o abscesos, los agentes antimicrobianos se les dificulta llegar hasta estos.

Síntesis Flagelar

Es un proceso complejo que envuelve muchos genes o sus productos. Las nuevas moléculas de Flagelina son transportadas a través del filamento hueco utilizando un sistema de secreción similar a Tipo III. Las subunidades del filamento se autoensamblan, con ayuda del filament cap, en la punta.

Evaluacion de Efectividad

Es un proceso complejo regulado por agencias federales. - EPA. - FDA. Prueba de Coeficiente de Fenol. Prueba de Uso Diluido. Prueba de Uso Normal.

Membrana Celular (Citoplasmica)

Es una bicapa de fosfolípido compuesta de lípidos y proteínas asociadas. Modelo del Mosaico Fluido.

AHL (Acylhomoserine Lactone)

Es una molecula autoinductora producida por muchos organismos gram negativos. Esta se difunde a traves de la membrana plasmatica. - Dentro de la celula, induce la expresion de genes especificos para regular una variedad de funciones. Tiene diferentes funciones en diferentes especies.

Método Kirby Bauer

Es una prueba de discos de difusión bajo parametros específicos. Se utilizan tablas para relacionar el diametro con la sensitividad/resistencia. Mientras menor es el MIC, más sentitivos son los microorganismos.

Gram Positiva y Gram Negativa

Es util para identificacion. NO SON GRUPOS NATURALES DE BACTERIAS. Estas distinciones no reflejan la evolución de los distintos grupos de bacterias.

Menos del 1%

Especies de Bacterias Cultivables. Especies de Bacterias Patogénicas a Humanos.

Resistencia de Endosporas

Esta dada por: - Calcio. + Complejado con Acido Dipicolinico. - Small, acid-solube, DNA-binding proteins. - Centro deshidratado. + Baja actividad de agua. - Protección por el Spore Coat y el Exosporium. Se han encontrado endosporas de hasta 30 millones de años.

Estructura del Flagelo

Esta hecho de Flagelina. Se compone de: - Filamento. - Gancho. - Cuerpo Basal. Es hueco. - Las nuevas unidades de Flagelina pasan a través del hueco y son añadidas en la parte superior.

Estructura de Endosporas

Esta rodeada de capas finas llamadas exosporium. Capas gruesas de proteinas forman el spore coat. Cortex, debajo del spore coat, es una capa gruesa de peptidoglucano. El core tiene el nucloide y ribosomas.

Slime Layer (Glicocaliz)

Esta sujeta libremente a la superficie de la célula. Es soluble en agua. Su capa pegajosa permite que los procariotas se peguen a superficies.

Hopanoides

Estabilizan la membrana. Son encontrados en petroleo. - Millones de toneladas en sedimentos. Son bien resistentes a degradación. Salen de células muertas y se acumulan.

Alcoholes

Estan entre los desinfectantes y antisepticos más utilizados. Los mas comunes son Etanol e Isopropanol. Bactericida y Funguicida, pero no Esporicida. Inactiva algunos viruses. Desnaturaliza proteinas, y posiblemente disuelve la membrana lipidica.

Microscopio Compuesto de Campo Brillante

Este tipo de microscopios es el que se utiliza en el laboratorio. Hay que remover el objetivo antes de sacar la laminilla. - Esto podria rayar o dañar la lente. Una vez que ha enfocado, no baje la plataforma. Se debe empezar con el lente objetivo más bajo. Si se usa el 100x (aceite), no se puede regresar al 40x, pues se ensucia. - Por lo regular se utilizan en orden (4x, 40x, 100x).

Hemocitómetro

Estima la cantidad de microbios. Es cuantitativa. Es rapida. Es barata. No hay que esperar crecimiento. Cuenta todas las células.

Endospora

Estructura compleja inactiva formada por ciertas bacterias. Puede tener varias localizaciones dentro de la célula. Es resistene a muchas condiciones ambientales. - Calor. - Radiación. - Químicos. - Desecación.

Ribosomas

Estructuras Complejas de Proteína y RNA. Tiene distintos sitios para la síntesis de proteína.

Quistes (Protozoa)

Estructuras parecidas a las endosporas, pero un poco más débiles.

Hami

Estructuras parecidas a los Fimbria en Archeas. - Muchas Archeas tienen Fimbria Permiten que las archeas se peguen a las superficies.

Ambientes ácidos en el cuerpo humano

Estómago (1-5). Vagina (3.8-4.5). Orina (6.0). Saliva (6.0-7.4). El pH normal de la sangre es 7.4.

Log Phase

Etapa de la curva de crecimiento en la que las bacterias estan en crecimiento.

Lag Phase

Etapa de la curva de crecimiento en la que las bacterias se estan adaptando al medio.

Death Phase

Etapa de la curva de crecimiento en la que se acaban los nutrientes.

Stationary Phase

Etapa estable de la curva de crecimiento. - Por cada célula que muere, se genera una nueva.

Halogenos

F, Cl, Br, I, At. Son importantes agentes microbianos.

Primer Genoma Virulento Secuenciado

Fago X174.

Magnificación Vacía

Fenómeno en el que se pierde resolución al magnificar la imagen. Esto ocurre con las imagenes que se tomas de una magnificación en el microscopio.

Movilidad de Espiroquetes

Flagelos multiples forman el axial fibril que se enrolla alrededor de la célula. El Flagelo se mantiene en el espacio periplasmico dentro de la pared celular. Son en forma de saca corchos. Muestran movimientos de flexión y rotación.

Resolución

Habilidad de distinguir dós líneas en una imagen.

Factores que Influencian la Efectividad de las Drogas Antimicrobianas

Habilidad de llegar al sitio de infección. Susceptibilidad del patógeno a la droga. Habilidad del cuerpo de tolerar concentraciones mayores al MIC del patógeno.

Citoesqueleto

Hasta hace poco se pensaba que las bacterias no lo tenian. - Se han encontrado homologos de los 3 elementos eucarioticos en bacterias. Tiene funciones similares al eucariotico. - Dar forma a la celula. - Permite el movimiento. - División Celular. FtsZ - Se encuentra en muchas bacterias. - Forma anillos durante la formación del septum en la division celular. CreS - Raro. - Mantiene forma curveada.

Martinus Beijerinck (1851-1931)

Holandés. Cultivos de enriquecimiento para ciertas bacterias. Primero en aislar muchos grupos de bacterias ambientales. Descubrió el primer virus. - Tobacco Mosaic Virus.

Antoni van Leeuwenhoek

Holandés. Era mercader. Comenzó a construir y utilizar microscopios simples inicialmente para examinar la calidad de las telas. Observó la mayoría de los grupos de microorganismos, excepto los viruses. - Examinó muestras de agua, y vió pequeños animales, hongos, algas, y protozoos unicelulares. + Los llamaba "animalitos". Enviaba informes a la Sociedad Real en Londres. - No era culto. - Solo hablaba holandés, que no era un idioma de ciencia en aquel entonces. Descubrió los microorganismos en su boca. - Luego, tomó muestras de las bocas de gente mayor que nunca se habían lavado la boca. + "El primer concepto del microbioma humano". La Reina de Inglaterra, y el Zar de Rusia lo visitaron, pero este no les permitió usar sus microscopios. - Era tan celoso con sus microscopios, por lo que muchos de sus trucos murieron con él. + Pasaron muchos años antes de ver otro avance en la microscopía.

Ignaz Semmelweis (1848)

Húngaro. Propone lavado de manos de los estudiantes de medicina en las salas de maternidad. La mortandad bajó de 18% a 1%. Se burlaron de él. Lo botaron del trabajo. Debió regresar a Hungría. Se deprimió. Lo internaron. Terminó muriendo a causa de la misma bacteria (Streptococcus).

Desinfección

Muerte, Remoción, o Inhibición de Organismos Patogénicos. Es mejor que la antisepsis porque se enfoca en remover agentes patogenicos en vez de prevenir infecciones.

Principales Causas de Muerte en 1900

Influencia y Pneumonia. Tuberculosis. Gastroenteritis. Enfermedades Microbianas.

Acyclovir

Inhibe la DNA Polimerasa del virus del Herpes. Otras drogas contra el herpes incluyen: - Valacyclovir. - Ganciclovir. - Foscarnet.

Drogas contra HIV

Inhiben la Transcriptasa Reversa, y las Proteasas. Se utilizan cocteles. - Combinaciones de Drogas.

AZT (Azidothymidine)

Inhibidor de Transcriptasa Reversa. VIH.

Isoniazida

Inhibidor de Trayecto Metabolico. - Antimetabolitos. Usada contra la Tuberculosis.

Cientificos que estudiaron como preveneir infeccion y enfermedad

Inmunología. - Jenner. - Pasteur. Higiene. - Semmelweis. - Nightingale. - Lister. Epidemiología. - Snow. Quimioterapia. - Fleming. - Ehrlich.

Galileo Galilei

Inventó el Microscopio, y el Telescopio.

Metales Pesados

Iones de Mercurio, Plata, Arsenico, Zinc, y Cobre. Son efectivos, pero usualmente toxicos. Se enlazan a las proteinas y las inactivan, podrian incluso precipitarlas.

Científicos que estudiaron las causas de enfermedades

KOCH -> principalmente. Bassi. Berkeley. Pasteur. - Estudiaron otras enfermedades antes que Koch con prácticas similares.

Adaptaciones de Termófilos

La estructura de sus proteínas es estabilizada por: - Más puentes de H. - Más residuos de Prolina. - Chaperonas. Proteínas parecidas a las Histonas estabilizan el DNA. La membrana es estabilizada por: - Lípidos más saturados, más ramificados, o de mayor peso molecular. - Enlaces tipo eter (membranas de archeas).

Microscopio de Campo Oscuro

La imagen esta formada por la luz reflejada o refractada por el especimen. Produce una imagen brillante contra un fondo oscuro. - Aumenta el contraste. Se utiliza para observar preparaciones vivas, y sin tinciones. - Se utiliza para observar estructuras internas de microorganismos eucarioticos. - Se utiliza para identificar bacterias como Treponema pallidum, el agente causante de la Sífilis.

Declive Prolongado

Las poblaciones bacterianas evuelven continuamente. Este proceso se ve marcado por olas sucesivas de variantes geneticamente distintas. Ocurre selección natural.

Temperatura

Los microbios no pueden regular su temperatura interna. Las enzimas tienen temperaturas óptimas. Altas temperaturas pueden inhibir la funcion enzimatica, lo cual puede ser letal. Existen 3 temperaturas importantes para los organismos: - Minima. - Optima. - Maxima.

Formación de Biofilm

Los microbios se enlazan reversiblemente a la superficie condicionada, y secretan polisacaridos, proteinas, y DNA para formar Sustancia Polimericas Extracelulares (EPS).

0.2 um

Límite Teórico de Resolución de un Microscopio de Luz.

Filtros de Aire

Mascarillas Quirurgicas. Tapones de Algodon en Material Serologico. Filtros HEPA. - High-Efficiency Particulate Air. - Flujo Laminar.

Soluciones Hipertónicas

Mayor concentración de soluto que en la célula. La célula pierde agua. - Células con o sin pared celular mueren.

Control Biologico

Mecanismos de Control Naturales. - Predación. - Lisis mediada por viruses. + Se usan lisinas de bacteriofagos especificos. - Bacteriocinas.

Indice de Refracción

Medida de cuanto una sustancia disminuye la velocidad de la luz.

pH

Medida de la acidez relativa de una solución. - log [H+]. Los hongos, en general, prefieren medios acídicos. Las bacterias, en general, prefieren medios básicos. Los organismos son sensitivos a cambios en acidez. - H+ y -OH interfieren con los puentes de hidrógeno. La mayoria de los microbios mantienen su pH interno alrededor del neutral. - La membrana plasmatica es impermeable a protones. - Intercambian Potasio por Protones. Varios microorganismos cambian el pH de su habitat produciendo desechos acidicos o basicos.

Tubos de Carbohidratos

Medios deferenciales. Tienen 2 indicadores de utilizacion del azucar: Cambio en color. - Indicador de pH. Producción de Gas. - CO2 atrapado en tubo Durham invertido.

Medios Diferenciales

Medios en los cuales diferentes grupos tienen apariencia distinta.

Medios Definidos

Medios en los cuales se conocen todos los compuestos químicos presentes.

Halófilos

Microbios que crecen optimamente en la presencia de NaCl u otras sales a concentraciones mayores de 0.2 M. - El agua de mar tiene una concentración de 0.5 M.

Muerte Microbiana

Microorganismos no son matados instantaneamente. La muerte de la poblacion ocurre exponencialmente.

Técnicas usadas para estudiar microorganismos

Microscopía. Cultivos. Técnicas de Biología Molecular (secuenciación de DNA). Técnicas Inmunológicas (ELISA). Técnicas Bioquímicas (Biolog).

Quinolonas

Moleculas capaces de matar a las bacterias inhibiendo la DNA-girasa y las Topoisomerasas II. Son bactericisas de espectro amplio. El primero sintetizado fue el Acido Nalidixico.

Mecanismo de Movimiento Flagelar

Motor de 2 partes que produce torque. Rotor. - Anillo de proteína gira e interactua con el estator. Estator - Proteínas Mot A y Mot B. - Forman un canal a través de la membrana plasmática. + Protones se mueven a través de los canales usando energía de un gradiente de protones. El torque energiza la rotación del cuerpo basal y el filamento.

Archea

Muchas son extremófilas. - Especialmente Termófilas. La gran mayoría nunca han sido cultivadas. Ninguna es patógeno humano. Son poco conocidas. Tienen diversidad de morfologías.

Curvas de Crecimiento

Muestran una tendencia exponencial. Por lo regular se utiliza una escale logaritmica para poder obtener una linea recta. Presenta 4 etapas esenciales: - Lag Phase. - Log (Exponential) Phase. - Stationary Phase. - Death (Decline) Phase.

Robert Koch (1843-1910)

Médico Alemán. Tuvo muchas contribuciones. - Técnicas de tinción de muestras. - Primera micrografia de bacterias. - Primera micrografia de bacterias en tejido. - Ténicas para estimar CFU/mL. - Uso de vaor para estirilizar medios de cultivo. - Uso de placas Petri. + Roberto Petri (su ayudante) las inventó. - Uso de medios de Agar. + Geezi (su otro ayudante) inventó su uso. - Técnicas de transferencia de bacterias. Antes de él, se cultivaban bacterias en pedazos de papa. Estudio Antrax y Tuberculosis.

Edward Jenner (1796)

Médico Inglés. Inventó la primera vacuna moderna, contra la viruela. - Hace miles de años, en China, tomaban el pus e inoculaban a niños sanos. + Esto no era muy seguro. Una lechera joven le informo que no podia infectarse de Smallpox porque ya habia tenido Cowpox. - Jenner entonces inoculó a un niño con pus que contenía el virus del Cowpox. + El niño mostró protección (inmunidad) contra el Smallpox.

Lazzaro Spallanzani (1729-1799)

Naturalista Italiano. Seguía los pasos de van Leeuwenhoek. Realizó experimentos de esterilización para desmentir la generación espontánea con caldos cocidos y/o inoculados. - Al calentar, pero dejar expuesto al aire, el caldo se observaba turbio, por el crecimiento de microorganismos. - Al calentar, y mantener aislado del aire, el caldo quedaba claro. Concluyó que: - Needham falló en calentar lo suficiente como para matar todos los microbios, o que los envases no habían sido sellados lo suficientemente fuerte. - Microorganismos existen en el aire y pueden contaminar los experimentos. - No ocurre generación espontánea de microorganismos. Los críticos argumentaban que sellar los envases no permite la entrada de aire suficiente como para que los microorganismos sobrevivieran, y que el calor prolongado destruía la "fuerza de vida".

Entrada del Virus al Cuerpo

Necesita engancharse a los receptores ACE-2 que se encuentra en la superficie de las células. TODAS LAS CELULAS HUMANAS TIENEN ACE-2. - Por esto la gama tan amplía de síntomas.

Dosis Tóxica

Nivel de droga en el que se tornan demasiado tóxicas para el paciente. - Procuden efectos secundarios.

Dosis Terapéutica

Nivel de droga requerido para tratamiento clínico.

Anaeróbicos Estrictos

No pueden vivir en presencia de oxígeno. Se encuentran en el fondo del tubo. No tienen Superoxido Dismutasa, ni Catalasa. Deben ser cultivados en una estación de trabajo especial, o con un sistema anerobico. - Jarra con Vela. + La vela consume el oxigeno que queda dentro de la jarra. - GasPak. + Camara con un sobre con H2 y CO2. * Se remueve el O2 al reaccionarlo con H2 para producir agua.

R0

Número reproductivo de la enfermedad. ¿Cuantas personas infecta adicionalmente cada persona? La meta es que sea menor de 1.

Fleming

Observó la actividad de penicilina en placas contaminadas en el 1928. No pensó que se podía desarrollar.

Alexander Fleming

Observó que el hongo Penicillium producía un antibiotico (Penicilina) que mata S. aureus. En los 1940s, la Penicilina fue probada clinicamente, y producida masivamente.

Drogas Antiprotozóicas

Organismos Eucariotas. Cloroquina. Sus mecanismos son desconocidos.

Cloro

Oxida las celulas constituyentes. Es importante en la desinfeccion de agua y piscinas, se usa en la industria de comidas, y es un desinfectante efectivo para el hogar. Destruye bacterias y hongos vegetativos. Su gas es Esporicida. Puede reaccionar con materia organica, y formar compuestos carcinogenos.

Arreglos

Pares: - Diplococci, diplobacilli. Clusters: - Staphylococci. Cadenas: - Streptococci. - Sreptobacilli. Dependen del plano de división.

Pasteurización

Pasteur demonstró que las bacterias que provocan el daño en el vino se podían matar con calor, pero que no era tan caliente como para evaporar el alcohol en vino. High heat for a short time. No fue el primero, ya se utilizaba este proceso en China.

Cientifico que estudio la Fermentacion

Pasteur.

Inhibidores de Síntesis de Pared Celular

Penicilinas. Cefalosporinas.

Tinciones Especiales

Permiten observar un componente particular de la célula. Incluyen: - Tinciones Negativas (Capsulas). - Tinciones Flagelares.

Ferdinand Cohn (1828)

Polonia. Sistema de clasificación de bacterias. Descubrió las endosporas de las bacterias. Estudio el ciclo de vida de bacterias: - Bacteria -> Espora -> Bacteria.

Pseudomureina

Polímero parecido al peptidoglucano. Su enlace beta-(1,3) no es susceptible a lisozima. En vez de acido N-acetilmuramico tiene acido N-acetiltalosaminuronico.

Nucleoide

Por lo general, no esta rodeado por una membrana. Contiene el cromosoma, y proteínas asociadas. Usualmente 1 molécula de DNA de doble hebra circular. - Supercoiling y Proteínas ayudan a plegarlo. NO HISTONAS.

Microscopio Electronico de Barrido (SEM)

Por lo general, se coloca la muestra sobre una placa de oro. Solo se ven las superficies. Las imágenes son en blanco y negro. - Por lo regular se utilizan programados como Photoshop para pintar las imagenes.

Fijación

Preserva estructuras internas y externas, y las fija en posición. Los organismos, por lo regular, son matados y fijadas firmamente a una laminilla.

Antisepsis

Prevención de infecciones a un tejido vivo.

Microscopio de Campo Brillante

Produce una imagen oscura contra un fondo brillante. Tiene varios lentes de diferentes objetivos.

Antibióticos

Productos microbianos o sus derivados que matan o inhiben el crecimiento de microbios susceptibles.

Estrategia de Venter

Secuenciar todo sin poner en orden. "Shotgun Sequencing". Más Bioinformática.

Funciones de la Capa S

Protege de iones y fluctuaciones en pH, del estrés osmótico, de enzimas, y de predación. Mantiene la forma y rigidez. Promueve la adhesión a superficies. Protege contra defensas del hospedero.

Priones

Proteínas capaces de provocar una infección. Son las más resistentes. Temperatura, Agentes Químicos y Tratamientos Físicos no suelen tener efecto.

Funciones de la Pared Celular Bacteriana

Proveen estructura, forma, y fuerza a la célula. Protegen la célula de fuerzas osmóticas. Protegen la célula de estres ambiental. - Calor, Sequia, etc. Asisten a algunas células a unirse a otras células. Asisten algunas células a resistir drogas antimicrobianas.

Fimbria

Proyecciones pegajosas, parecidos a cerdas de un cepillo. Son usadas por las bacterias para adherirse unas a otras, con el hospedero, o con sustancias en el ambiente. Son más cortas que los flagelos. Tienen funciones importantes en los biofilms.

Prof. Zhang (Instituto de Virología de Wuhan)

Publicaron la primera secuencia genómica del SARS-CoV-2 (10/enero). - Fue aislada de muestras nasales de pacientes infectados. 2 días después, las autoridades locales cerraron su laboratorio y revocaron su licencia de investigación.

Girolamo Fracastoro (1546)

Publicó el libro que describía por primera vez todas las enfermedades que se calificaban como contagiosas en aquel momento. Clasificó las enfermedades, y establece 3 formas posibles de infección: - Por Contacto Directo (Rabia, Lepra). - Por medio de Fomites Transportando la "Seminaria" (en ropas de los enfermos). - Por inspiración del aire o Miasmas infectados con la Seminaria (Tisis). Agrega como entidades nuevas el Tifus y la Sífilis. Fue el primero en establecer claramente el concepto de enfermedad contagiosa. Escribió "Sífilis o el mal francés". - Poema en el que un pastor español de nombre Sífilis es castigado con esta enfermedad por no respetar a los dioses. - Despues describió las formas que se podía contagiar la Sifilis por transmisión Sexual.

Anaeróbicos Aerotolerantes

Pueden tolerar el oxígeno. Se encuentran en todo el tubo. Tienen Superoxido Dismutasa, pero no Catalasa.

Microaerofilos

Pueden tolerar pequeñas concentraciones de Oxigeno. Suelen verse un poco más abajo de la parte superior del tubo. Tienen Superoxido Dismutasa, pero niveles bajos de Catalasa.

Punto Focal

Punto especifico al que un lente enfoca los rayos de luz.

Louis Pasteur (1822-1895)

Químico Francés. Aportó las 4 preguntas principales de la Edad Dorada de la Microbiología. Estudió los isómeros ópticos de ácido tartárico en vino. - El hongo Aspergillus solamente metaboliza el D-tartarico. - Encontró lo mismo en la levadura. La asimetría, en general, es evidencia de actividad biológica. - La asimetría en el ácido tartárico le hizo pensar que fue por actividad biológica. Realizó experimentos en Matraces de Cuello de Cisne. - Cuando el matraz permanecía upright, no aparecía crecimiento microbiano. - Cuando se giraba el matraz, polvo del que se encontraba en la boca entraba al matraz haciendo que el caldo se tornara turbio con microbios. Explicó 3 procesos misteriosos: - Fermentación. - Putrefacción. - Enfermedad Infecciosa. Desarrolló muchas técnicas: - Técnica del Cultivo Puro. - Técnica de Pasteurización. - Vacunas para la rabia, antrax, y otros. Desarrollo el "Germ Theory of Disease".

Antibioticos

Químicos producidos por bacterias, plantas, y/u hongos que inhiben o matan microbios. Ej. Quinina del Tree Bark fue usada grandemente para tratar Malaria.

Radiación Ionizante

Radiación gamma penetra profundo en objetos. Destruye endosporas, pero no siempre es efectivo contra viruses. Se usa para la esterilizacion y pasteurizacion de antibioticos, hormonas, suturas, plasticos desechables, y comida.

Indice Terepéutico

Razón de Dosis Tóxica a Dosis Terapéutica. Toxica/Terapeutica.

Next Generation Sequencing (NGS)

Realizar millones de secuencias en una sola corrida. Precio ronda los 3 mil a 15 mil dolares. Marcas: 454, Illumina, IonTorrent, ...

Remdesivir

Recientemente aprovado por la FDA contra el SARS-CoV-2. Es un análogo de nucleótidos. Fue diseñado para convartir infecciones virales mortales como Ebola y Marburgo. Al ser aprobado para otra enfermedad, ya pasó por una serie de pruebas. - Seguridad ya fue probada. Su producción es de $10, pero el tratamiento ronda los $3 mil.

Cientificos que estudiaron Generación Espontanea

Redi. Spallanzani. Needham. Pasteur.

Sanitización

Reducción de poblaciones relacionada a alcanzar niveles considerados como seguros.

Filtración

Reduce la población microbiana o esteriliza soluciones de materiales sensibles al calor removiendo microorganismos. - Para esterilizar se requieren filtros de menos de 0.2 um. Tambien se usa para reducir la poblacion en aire. Depende de la porosidad del filtro.

Microbios en Soluciones Hipotónicas

Reducen la concentración osmótica del citoplasma. Canales Mecanosensitivos (MS) en la membrana permiten que solutos salgan de la célula. - Este proceso gasta energía.

Vivir en pH extremo

Requiere sacar o importar protones en contra de su gradiente, lo que requiere de ATP. Sin embargo, existe menos competencia en este tipo de ambiente por lo que los microorganismos especializados pueden hacer su nicho alli.

Aeróbicos Obligados

Requieren de Oxígeno para poder sobrevivir. Suelen verse en la parte superior de un tubo. Tienen Superoxido Dismutasa, y Catalasa.

Halófilos Extremos

Requieren de concentraciones de sal entre 2 y 6.2 M. Tienen concentraciones extremadamente altas de K. La pared celular, las proteínas, y la membrana plasmática requieren de altas concentraciones de sal para mantener su estabilidad y actividad. Ej.: Microorganismos en las Salinas de Cabo Rojo. - El color violeta en el agua es producido por una archea.

Microscopio de Transmisión Electrónica (TEM)

Requieren de un tinte (usualmente un metal pesado) para que pueda interactuar con el haz de electrones. Se puede ver el interior de las células.

Colonias

Resultado de crecimiento microbiano en Agar. Son agregados de células que se desarrollan a partir de un CFU. - No se sabe con certeza si es una o varias células.

Craig Venter

Retó al NIH con el 10% del presupuesto. - $300 millones. Decidió secuenciar su propio genoma. Su próximo proyecto era secuenciar el genoma de su Poodle. Produjo el primer metagenoma. - Metagenoma del Agua del Mar de Sargasso. - Filtros 0.1 - 3 um. - Shotgun Sequencing + Mucho DNA degradado. - Identificaron por Busqueda BLAST.

John Needham (1713-1781)

Reverendo Inglés. Oponente de Spallanzini.

Tipos de Movimiento

Run -> Coordinado. Tumble -> Descordinado.

Factor Principal del Crecimiento

SALINIDAD.

Condiciones Ambientales que Afectan el Crecimiento

Salinidad/Presión Osmótica. pH. Temperatura. Concentración de O2. Presión. Radiación.

Prueba de Coeficiente de Fenol

Se compara la potencia de un desinfectante con la de Fenol. Es útil, pero puede ser misleading. - Se aplica a compuestos fenolicos o parecidos.

Lípidos A

Se encuentran en la superficie de la membrana externa. - Se convierten en endotoxinas. - Son tóxicos a animales. Pueden provocar: - Inflamación. - Fiebre. - Choque Tóxico. Por esto las bacterias gram negativas se suelen tratar con antibioticos sistemicos. - Es inevitable la liberacion de las endotoxinas.

Inhibidores de Síntesis de Proteínas

Se enlazan especificamente a los ribosomas bacterianos. Inhiben algun paso de la síntesis de proteínas. - Enlace Aminoacil-tRNA. - Formación de Enlace Peptídico. - Lectura de mRNA. - Translocación. Aminoglucosidos. Tetraciclinas. Macrolidos. Cloramfenicol.

Filamento (Flagelo)

Se extiende desde la superficie celular hasta la punta. Es hueco. Es un cilindro rígido de Flagelina.

Método Científico

Se fue desarrollando con el debate sobre generación espontanea. 1. Observacion lleva a Pregunta. 2. Pregunta genera Hipotesis. 3. Se prueba la Hipotesis a traves de Experimentacion. 4. Resultados prueban o rechazan la Hipotesis. - Hipotesis provadas llevan a teorias/leyes. - Hipotesis rechazadas pueden ser modificadas, pero se debe experimentar otra vez.

Microscopios Fluorescentes

Se irradia el especimen directamente con una fuente de luz ultravioleta. El especimen irradia energía en un largo de onda más alto, en el espectro visible. La luz ultravioleta aumenta la resolucion y el contraste. Algunas células la pueden producir naturalmente, mientras que otras deben ser teñidas. Se utiliza en inmunofluorescencia para identificar patógenos y para hacer visible una variedad de proteínas. La fuente de luz suele ser una bombilla de Mercurio. Espejos y Filtros permiten que se irradie con un largo de onda, y se observe la fluorescencia a otro largo de onda.

Ejemplos de los Postulados de Koch

Se le da el crédito a Koch porque este lo aplicaba más rigurosamente, pero ya otros llevaban a cabo prácticas similares. 1835: Agostino Bassi mostró que una enfermedad en gusanos de seda era causada por un hongo. - 50 años antes de los postulados. 1845: Rev. J.M. Berkeley mostró que el tizón tardío era causado por Phytophthora. 1865: Pasteur mostró que otra enfermedad de gusanos de seda era causada por un protozoo.

Inmunofluorescencia

Se liga un anticuerpo a una molécula fluorescente. - El anticuerpo es específico al antígeno de interés.

Esterilización con Vapor

Se lleva a cabo a 121 °C, 15 psi, por 15 minutos. - La presión no mata. - La temperatura si. Se usa un autoclave. - En un recipiente cerrado. Es efectivo contra todos los tipos de microorganismos. - Incluso esporas. Control de Calidad incluye strips con Geobacilus stearothermophilus. - Esporas altamente resistentes a temperatura. - Si se afectan, se puede asumir que la esterilizacion fue efectiva.

Microscopios Parafocales

Se mantienen en foco aún cuando se cambian los objetivos.

Micosas Superficiales

Se pueden tratar con drogas tópicas u orales. Disrumpen la permeabilidad de la membrana, e inhiben la sintesis de esteroles. Disrumpen el huso mitotico, y podrian inhibir la sintesis de DNA y Proteinas.

Prueba de Catalasa

Se realiza añadiendo una gota de agua oxígenada. Si se forman burbujas, el organismo tiene esta enzima.

Identificar una Secuencia

Se realiza una búsqueda BLAST para comparar la secuencia con las secuencias de un banco de datos.

Prueba de Uso Comun

Se realizan pruebas usando condiciones aproximadas a aquellas en las que se utilizarian normalmente.

Rastreo Genético

Se secuencia el RNA del virus de diferentes muestras para ver si ha mutado.

Diluciones Seriales

Se trata de diluir la cantidad de microorganismos varias veces. La placa a contar debe tener entre 30 y 300 colonias. Solo se detectan células vivas. Ventaja: Cuantización. Desventaja: Muchas Placas, Mucho Tiempo.

Magnificación Total

Se trata de la producción del lento ocular y el lente objetivo.

Fijación con Calor

Se usa rutinariamente con bacterias y archaeas. Preserva la morfología, pero no estructuras internas. Fue una técnica inventada por Robert Koch.

Gases Esterilizantes

Se usan para esterilizar materiales sensibles a calor. Microbicidas y Esporicidas. Oxido de Etileno se usa en un equipo similar a un autoclave. Betapropiolactona, y Peroxido de Hidrogeno. Se enlazan a DNA y proteinas y los inactivan.

Fijación Química

Se utiliza con organismos más grandes, y delicados. Protege las subestructuras celulares finas, y su morfologia. Por lo regular se usa con tejidos de animales y plantas.

Tinción para Microscopia Electronica

Se utilizan químicos que contienen metales pasados utilizados para TEM. Ej. Osmio -> Tiñe lipidos.

Cultivos Puros

Se utilizan técnicas asépticas y medios de cultivo esteriles para prevenir la contaminación de sustancias y objetos esteriles.

Funciones de la Membrana Celular

Selectivamente Permeable. - Suele ser impermeable a la mayoría de las sustancias. Proteínas permiten que algunas sustancias la traspasen. Mantiene concentraciones y gradientes electricos. Permiten colectar energía de la luz en bacterias fotosinteticas. Producción de Energía. - Actua como las mitocondrias, o como los cloroplastos.

Seminaria contagiorum

Semillas vivas capaces de provocar la enfermedad.

Cuerpo Basal (Flagelo)

Serie de anillos que dirigen el motor flagelar. Une al Gancho y el Filamento a la Pared Celular por una barra y una serie de 2 o 4 anillos de proteínas integrales.

Precio de Secuenciación ADN

Sigue la Ley de Moore. Ha bajado drasticamente desde el 2007.

Citoplasma Archea

Similar a Bacteria: - Ribosomas 70 S. - DNA circular. Similar a Eucaria: - Codigo genetico similar al de eucariotas. - Histonas. - Ribosomas tienen RNA de 5.8 S. - Tiene más proteinas similares a las de eucariotas que a las de bacterias. La diferencia entre los 3 dominios parece no estar completamente resuelta.

80%

Similitud entre el COVID-19 y el virus del SARS.

Cloramfenicol

Sintetizado químicamente. Se enlaza a la subunidad 50S. - Inhiben la reacción de Transferasa. Es tóxicon con un sinnumero de efectos secundarios. - Solo se utiliza en situaciones de vida o muerte.

Tucídides

Sobrevivió la peste negra, y se dió cuenta de que ya no se le pegaba. - Tardarían 1800 años más en mejorar su explicación de enfermedades.

Solución Hipertónica

Soluciones con concentración osmótica alta. Sale agua de la célula. - Se encoge, y puede ocurrir plasmólisis.

Solución Hipotónica

Soluciones con concentración osmótica baja. Entra agua a la célula. - Se hincha, y puede explotar.

Micosas Sistemicas

Son dificiles de controlas y pueden ser fatales. 3 drogas comunes: - Amfotericina B. + Se enlazan a los ergoesteroles en membrana. + Crea un poro en la membrana, y destruye la celula. - 5-flucitosina. + Disrumpen la funcion de RNA. - Fluconasol. + Se usa profilacticamente. + Tienen pocos efectos secundarios. Myconazole y Ketoconazole. - Inhiben la sintesis de ergoesteroles.

Cefalosporinas

Son estructuralmente y funcionalmente similares a las penicilinas. Anillo Betalactamico. Es utilizada en pacientes que son alergicos a la penicilina. Tiene un espectro mayor que la penicilina.

Viruses con Envoltura

Son los más susceptibles. Envoltura puede ser afectada facilmente con agentes fisicos o agentes químicos.

Drogas Antifungales

Son menores los agentes efectivos pues son células eucariotas. - Es más dificil no afectar las células del hospedero. Es más facil tratar micosas superficiales que infecciones sistemicas. - Se puede usar una combinacion de drogas.

Bacterias Gram Negativas

Son más complejas. Tienen membrana externa. - Tinte no se puede enlazar al peptidoglucano. Peptidoglucano es poco (10%). Tienen espacio periplasmico, con muchas enzimas. Tienen lipopolisacaridos en la membrana de afuera. - Lipidos A Son más permeable que la membrana plasmática porque tiene proteínas porinas y transportadoras. - Porinas permiten el paso de moleculas pequeñas (600 - 700 daltons).

Bacterias Gram Positivas

Son más gruesas. No tiene membrana externa. - Tinte se puede enlazar al peptidoglucano. - Se observan de color violeta. Tienen una capa gruesa de peptidoglucano. Contienen polialcoholes únicos (Acidos Teicoicos). - Si esta pegado a la membrana, se llaman Acidos Lipoteicoicos. - Protegen de sustancias en el ambiente. - Pueden enlazarse a células hospederas. Algunas tienen una capa de proteina en la superficie de peptidoglucano.

Pili

Son más largos que los Fimbria, pero más cortos que los Flagelos. Puede haber de 1 a 10 por célula. Se utilizan para transferir DNA de una célula a otra. - Conjugación Sexual.

Mycobacterium

Son un grupo de Gram positivas. - No tiene membrana externa. Tienen una membrana externa de acido micolico y lipido. - Ayuda a sobrevivir desecación. - Es muy dificil de teñir. + Por eso se usa la tincion acido-resistente.

Drogas Antivirales

Su desarrollo ha sido lento porque ha sido dificil target la replicación viral. Las drogas utilizadas actualmente inhiben enzimas especificas de viruses y los procesos ciclicos.

Lipidos en la Membrana

Su nivel de saturación refleja las condiciones ambientales, como la Temperatura. No contiene esteroles, pero si moleculas parecidas: - Hopanoides.

Funciones del Flagelo

Su rotación propele las bacterias a través de su medio ambiente. Su rotación es reversible. - Puede ser a favor o en contra de las manecillas del reloj. Permite que la bacteria se mueva como respuesta a estimulo. - Taxis.

Carolus Linnaeus (1707-1778)

Sueco. Desarrolló un sistema taxonómico para nombrar plantas y animales, y para agrupar organismos similares. Este mismo sistema es el utilizado para bacterias.

Glicocálices

Sustancia pegajosa y gelatinosa que rodea el exterior de la célula. Está compuesto de polisacáridos, polipéptidos, o una combinación de ambos. Existen 2 tipos: - Cápsula. - Slime Layer. Contribuyen a los biofilms.

Condiciones que Influencian la Efectividad de Agentes Antimicrobiales

Tamaño de la población. Composición de la población. Concentración. Duración. Temperatura. Ambiente Local. - pH, Viscosidad, Concentracion de Materia Organica. - Biofilms.

D Value

Tiempo de Reducción Decimal. Tiempo que se toma en matar al 90%. Debe asegurar que las celulas persistentes estan muertas.

Generation Time

Tiempo requerido para que se duplique el tamaño de la población. Varia dependiendo de la especie de microorganismo y las condiciones de su ambiente. El rango va desde 10 minutos (para algunas bacterias) hasta días (para algunos microorganismos eucariotas).

Pared Celular Archea

Tiene Capas S variadas enlazadas a la membrana plasmatica. Tiene Pseudomureina, usualmente como su capa externa. - Similar a Gram Positivas. En algunas especies se encuentran otros polisacaridos, proteinas, o glucoproteinas complejos. SU ESTRUCTURA ES SUPER VARIABLE.

Historia de la Microbiología

Tiene un enfoque eurocentrista. Todos son hombres blancos europeos. Al no conocer otras lenguas, no se tomaban en cuenta esos otros trabajos.

Aminoglucosidos

Tienen enlaces glucosídicos y grupos amino. Inhiben síntesis de proteínas. Estreptomicina. - Se asocia a la subunidad 30S.

Microscopía Electrónica

Tienen mayor poder de resolución y magnificación. Pueden magnificar objetos de 10,000x a 100,000x. Permiten vistas detalladas de bacterias, viruses, estructuras celulares internas, moleculas, y átomos grandes. Sus lentes son imanes que doblan el haz de electrones. Existen 2 tipos: - De transmisión (TEM). - De barrido (SEM).

Células Pequeñas

Tienen mayor área superficial relativa a volumen. Tienen mayor intercambio de nutrientes por unidad celular. Tienden a crecer más rápido.

Células Grandes

Tienen muchos más retos de intercambio con el medio. Se les hace más dificil sobrevivir.

Tetraciclinas

Tienen una estructura de 4 anillos con diferentes cadenas laterales. Son agentes bacteriostaticos de espectro amplio. Se combinan con la subunidad 30S e inhiben el enlace aminoacil-tRNA. Se suelen utilizar para tratar el acne.

Tinción de Gram

Tinción diferencial inventada por el danés Hans Christian Gram en el 1884. Intentaba buscar estructuras en tejidos animales, no bacterias. 1. Se aplica crystal violet. 2. Se aplica yodo (mordante). 3. Se hace un enjuague con alcohol (o una mezcla de alcohol/acetona). 4. Se aplica safranina (contratinte). Suele ser el primer paso en un laboratorio clínico.

Tinción Acido-Resistente

Tinción para Mycobacterium. 1. Se utiliza Carbofucsina con calor para penetrar la pared celular. - Capa de acido micolico y lipido. 2. Se hace un lavado con EtOH y HCl. - Quita el tinte de todas las celulas excepto Mycobacterium. 3. Se agrega azul de metileno como contratinte.

Tinciones Diferenciales

Tinción que distingue entre tipos de células. Incluye: - Tinción de Gram. - Tinción Acido-Resistente. - Tinción de Endosporas.

Tinción Negativa (Capsulas)

Tinte no penetra la capsula, sino que crea un tipo de halo alrededor de ella.

Tinción Simple

Tiñe todo por igual. Aumenta el contraste, pero no distingue entre células.

Tintes Básicos

Tiñen estructuras acídicas. Son colorantes catiónicos. Se pegan a moléculas con cargas negativas.

Tintes Acídicos

Tiñen estructuras alcalinas. Son colorentes aniónicos. Se pegan a moléculas con cargas positivas.

Metagenoma

Toda la materia genetica de una muestra ambiental. El genoma de un microbiota.

Bacteriocinas

Toxinas producidas por bacterias. Atacan o destruyen otras bacterias.

Sanachiro Hato (1910)

Trabajó con Ehrlich. Identificó compuestos de Arsénico que trataban efectivamente la Sífilis.

Quimioterapia

Tratamiento con Químicos. Estos agentes usados para tratar enfermedades infecciosas pueden ser drogas sintéticas o antibioticos. Mata o inhibe el crecimiento de mecanismos dentro del tejido del hospedero.

Placa Estriada (Streak Plate)

Técnica para aislar cultivos puros. Gasta menos placas, pero no es cuantitativa. Cada colonia es producida por un solo CFU. - No sabemos si fue una o varias células.

Placa Vertida (Pour Plate)

Técnica para aislar cultivos puros. Permite cuantizar. Cada colonia es producida por un solo CFU. - No sabemos si fue una o varias células.

Sergei Winogradsky (1856-1953)

Ucraniano. Estableció el papel de bacterian en ciclos de Nitrógeno, Azufre, etc. - Biogeoquímica. Fijación de N2 por bacterias en raíces de plantas. Métodos de enriquecimiento para ciertas bacterias.

Gancho (Flagelo)

Une el filamento al cuerpo basal.

Contigs

Unir secuencias que solapan. Ayudo a ensamblar el genoma entero de Prochlorococcus. - Organismo fotosintetico bien importante en oceanos. - No cultivable. Se conocia muy poco.

¿Cómo bajar el R0?

Usar Mascarillas. Distanciamiento Social. Lavado de Manos. Evitar Sitios con Muchedumbre. Rastreo de Contactos.

Cloroquina

Utilizada contra la Malaria. Un análogo ha sido considerado como tratamiento para el COVID.

Sulfamidas

Utilizadas profilacticamente. Estructura similar a otra estructura importante en el trayecto metabolico del ácido fólico. - Compite con la enzima. - No permite la sintesis apropiada de acido folico.

Interés en Adaptación de Hipertermófilos

Valor Básico. Entender posibles mecanismos de la vida extraterrestre. Mercado de Biotecnología. - Taq Polimerasa (utilizada para PCR).

Tamaños de Microorganismos

Varian desde los viruses más pequeños (medidos en nanometros) hasta los protistas, y bacterias más grandes, que pueden llegar hasta 200 micrometros.